Вы здесь:
МЕДИЦИНА
КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. ПОДХОДЫ К ВЫБОРУ ТЕРАПИИ ВИТИЛИГО
Автор: Т. Г. Сазонтова, Е. В. Дворянкова, И. М. Корсунская, С. Б. Ткаченко, А. Г. Жукова
Т. Г. Сазонтова, Е. В. Дворянкова*, И. М. Корсунская**, С. Б. Ткаченко**, А. Г. Жукова
МГУ им. М. В. Ломоносова,
* Кожно-венерологический диспансер N 15,
** ММА им. И. М. Сеченова
Способность клеток кожи образовывать пигмент меланин является специфическим механизмом ее защиты от ультрафиолетового облучения. Нарушения меланиновой пигментации (меланозы) имеют разнообразные клинические проявления. Наиболее распространенное заболевание из гипомеланозов - витилиго.
Актуальность проблемы витилиго связана с его широким распространением в разных регионах и среди многих этнических групп, значительным влиянием заболевания на психосоциальный статус пациентов, отсутствием надежных терапевтических методов.
В течение последнего десятилетия изучалась роль свободнорадикальных процессов в патогенезе витилиго. Однако систематических исследований в этом направлении практически не проводилось, а имеющиеся данные разрозненны и настолько противоречивы, что не позволяют однозначно судить о характере изменений про- и антиоксидантного статуса клеток кожи при этом заболевании.
Согласно данным ряда авторов, накопление продуктов свободнорадикального окисления - важное патогенетическое звено развития витилиго [12, 28, 41], по мнению других, недостаточность обеспечения антиоксидантами является основным механизмом снижения активности меланоцитов [13, 37]. Развивая подобный теоретический подход, предлагаются и соответствующие способы терапии - с помощью накожного или внутреннего применения антиоксидантов - как небелковой, так и белковой природы, чаще всего рекомбинантных форм [33, 34, 39]. Есть сообщения о клинической эффективности подобных подходов, но нет информации относительно долговременности проявляющегося защитного эффекта.
Однако в клинике давно применяют методы лечения витилиго, различные по природе воздействующего фактора, но со сходным механизмом действия - активацией на начальном этапе свободнорадикального окисления и увеличением уровня активных форм кислорода (АФК). К ним относятся терапия с помощью ультрафиолетовых волн различной длины, воздействие лазера, применение псораленов, различных химических агентов и многообразные комбинации этих методов [2, 3, 7, 26, 31, 42]. Эффективность лечения при этом зависит от ряда факторов, из которых основными являются возраст пациентов, длительность заболевания и наличие сопутствующих патологий.
Таким образом, налицо противоречие между двумя разнонаправленными подходами к лечению депигментации - с помощью подавления и, напротив, индукции свободнорадикального окисления. Данное противоречие указывает на необходимость предварительной оценки антиоксидантного статуса и интенсивности свободнорадикальных реакций кожи у больных витилиго с целью дальнейшего выбора адекватного лечения.
Существует несколько основных трудностей в решении этого вопроса. Во-первых, до последнего времени оценку депигментированной кожи больных витилиго проводили при ее сравнении с нормально пигментированной кожей здоровых людей. Однако для выявления истинного состояния про- и антиоксидантного статуса в депигментированном пятне необходимо сравнение их с нормально пигментированными участками кожи этих же больных. Поэтому задачей нашего исследования стала оценка про- и антиоксидантных факторов в пигментированных и депигментированных участках кожи одного и того же больного витилиго. Во-вторых, сложна проблема выбора наиболее оптимальных параметров для адекватной оценки уровня свободнорадикального окисления и антиоксидантов. Как известно, функционально значимым является не столько абсолютный уровень про- или антиоксидантов в клетке, сколько соотношение между ними [4, 8, 18, 22, 24, 38, 43]. Особенно важно оценить не исходный уровень продуктов свободнорадикального окисления, а результирующую чувствительность ткани к окислительным
стр. 2
--------------------------------------------------------------------------------
процессам [9]. При витилиго это приобретает особое значение в связи с прогнозированием чувствительности кожи таких больных к действию индукторов активных форм кислорода (АФК), в частности ультрафиолета.
Цель работы - изучение в депигментированных участках кожи больных витилиго уровня антиоксидантной защиты и резистентности клеток кожи к свободнорадикальным процессам и сравнение полученных показателей с таковыми в пигментированных участках тех же больных.
Оценку про- и антиоксидантных компонентов проводили в биоптатах кожи больных витилиго 2 возрастных групп с помощью разработанного нами метода.
При разработке метода использовали немногочисленные и зачастую противоречивые литературные данные относительно состояния антиоксидантной системы и уровня свободнорадикальных продуктов в коже больных витилиго [7, 10, 12, 13, 17, 28, 35, 40]. Кроме того, учитывали также результаты оценки про- и антиоксидантного статуса, проведенной на других органах, в которых прямо показано, что повышение уровня антиоксидантной защиты не гарантирует состояние компенсации процессов с участием АФК, а указывает скорее на его интенсификацию. Действительно, именно появление избыточного уровня АФК приводит к активации различных белков срочного ответа, в том числе и с антиоксидантной функцией [5, 19, 20, 23, 27, 36]. Таким образом, для оценки соотношения свободнорадикальных процессов и уровня антиоксидантов в коже необходим был выбор адекватного, доступного и информативного способа оценки интенсивности свободнорадикальных реакций и антиоксидантных систем в коже при этом заболевании.
Исследуя витилиго и другие кожные заболевания, многие исследователи, в том числе и большинство зарубежных, ограничиваются определением различных параметров, связанных с оксидантным - антиоксидантным балансом в клетках и сыворотке крови, но не в коже [16]. Связано это со сложностью и трудоемкостью работы с кожей, а также малым объемом биоптатов. Кроме того, при заборе материала у пациентов возникают этические проблемы. Однако по результатам, полученным по соотношению про- и антиоксидантов при их измерении в крови, весьма трудно судить о процессах, протекающих непосредственно в коже. Такие данные малоинформативны вследствие высокого уровня прямых и непрямых антиоксидантов в клетках и сыворотке крови, что выражается зачастую в отсутствии изменений в уровне про- и антиоксидантов крови при различных патологиях. В наших экспериментах все параметры определялись непосредственно в коже больных витилиго.
Правда, существуют работы, в которых регистрацию про- и антиоксидантных компонентов проводили непосредственно в коже. Однако такие способы имеют свои недостатки и ограничения. Так, применяемый в последние годы способ оценки свободнорадикального окисления в коже с помощью спектроскопии электронного парамагнитного резонанса [21] требует высокой чувствительности, специального дорогостоящего оборудования, что ограничивает функциональные возможности этого метода в клинике.
Известен также способ оценки свободнорадикального окисления в коже по измерению уровня одного из продуктов этого процесса - малонового диальдегида и его производных [6, 29]. Однако, несмотря на его доступность, способ малоинформативен, поскольку при этом в коже измеряют только начальный, исходный уровень продуктов окисления. До настоящего времени именно этот параметр остается широко используемым и зачастую единственным, характеризующим степень защиты ткани от свободнорадикального окисления. В то же время в многочисленных работах показано отсутствие изменений исходного уровня свободнорадикальных продуктов при окислительном стрессе различной природы и отсутствие корреляции между состоянием организма (стресс, ишемия, температурный шок и адаптация) и начальным уровнем продуктов окисления [4, 8, 14, 15, 18, 22, 24, 25, 43].
Какой же параметр следует использовать в таком случае? В специально проведенном исследовании с применением многофакторного корреляционного анализа была выявлена роль отдельных компонентов про- и антиоксидантной системы и оказалось, что наиболее показательным является изучение не начального уровня свободнорадикального окисления, а кинетики накопления продуктов окисления при его индукции in vitro органическими гидроперекисями и эндогенными или экзогенными системами окисления [9]. Поэтому в нашем методе измеряли как начальный уровень тиобарбитурат-активных продуктов свободнорадикального окисления, так и уровень их накопления при индукции in vitro свободнорадикального окисления в биоптатах кожи больных витилиго.
стр. 3
--------------------------------------------------------------------------------
На основе проведенного анализа методов регистрации про- и антиоксидантов, их достоинств, недостатков и ограничений мы разработали эффективный и адекватный состоянию ткани способ определения состояния свободнорадикального окисления и антиоксидантных систем в участках поражения кожи у больных витилиго (патент на изобретение N 2241992 - 2003). В депигментированных и пигментированных участках кожи больных витилиго (биоптаты) на первом этапе определяли уровень ферментов антиоксидантной защиты - каталазы, супероксиддисмутазы [11], глугатионпероксидазы и глутатионредуктазы [32]. Затем, учитывая интенсивность изменения их активности, выбирали систему окисления, проводили индуцированное in vitro свободно-радикальное окисление и регистрировали уровень тиобарбитурат-активных продуктов до индукции и в ходе окисления [30]. В заключение сопоставляли изменения в соотношении про- и антиоксидантов в депигментированных пятнах и участках здоровой кожи одних и тех же больных витилиго. Полученные результаты характеризовали чувствительность кожи к АФК-повреждающим агентам. Для биопсии были выбраны 2 группы больных мужского пола 1-я группа - мужчины 20 - 24 лет и 2-я группа - подростки от 14 до 16 лет Учитывая этические проблемы при заборе материала, изучение компонентов про- и антиоксидантных систем в коже больных витилиго проводилось ограниченно: в 1-й группе протестировано 5 пациентов, а во 2-й - 3.
Оказалось, что депигментированные пятна отличаются от пигментированных пятен одних и тех же больных витилиго значительной модуляцией активности ферментов антиоксидантной защиты, за исключением глутатионпероксидазы, активность которой достоверно не различалась в пятнах витилиго по сравнению с контрольными участками кожи тех же больных.
Выявили существенное повышение активности фермента антиоксидантной защиты - супероксиддисмутазы (достоверно р<0,01), в среднем на 47% - в 1-й группе и на 35% - во 2-й (см. рисунок). Изменения активности супероксиддисмутазы у всех пациентов были однонаправленными; показатель увеличения активности этого фермента колебался в 1-й группе - от 31 цо 54%, а во 2-й - от 27 до 47%. Активность глутатионредуктазы повышалась незначительно - на 16%, но достоверно в обеих группах.
Изменения показателей активности каталазы уразных пациентов весьма значительны, в результате чего средние значения ее активности достоверно не отличаются в депигментированных и пигментированных участках. В 1-й группе пациентов увеличение активности каталазы достигало 14 - 22%, а ингибирование 8 - 12%. Во 2-й группе наблюдалась аналогичная ситуация. Ограничение в численности протестированных больных не позволяет сделать более определенные выводы относительно изменения активности каталазы. Однако можно утверждать о значительно повышенной активности супероксиддисмутазы в депигментированных участках кожи по сравнению с таковым показателем в пигментированных участках. Изменение активности этого фермента обычно регистрируют при хронических заболеваниях, старении, при сравнении различных линий экспериментальных животных либо животных разного пола и возраста [4]. Активация фермента редко достигает 20 - 25%, поэтому обнаруженная нами экстраординарная степень активации этого фермента (до 54%) указывает на возможную высокую интенсивность свободнорадикальных процессов.
Действительно, уже оценка начального уровня продуктов свободнорадикального окисления в 1-й группе подтвердила наши предположения - у всех пациентов этот показатель был повышен в среднем на 23% (см. рисунок). Индукция окисления in vitro позволила выявить еще более заметные изменения. Через 20 и 40 мин инкубации накапливалось соответст-
Изменения в депигментированном пятне больных витилиго в 1-й и 2-й группах (в % от значений в пигментированных участках кожи тех же больных) активности ферментов антиоксидантной защиты (1 - каталаза, 2 - супероксиддисмутаза, 3 - глутатионпероксидаза, 4 - глутатионредуктаза) и уровня свободнорадикального окисления (5 - исходный уровень продуктов окисления, 6 - скорость накопления продуктов при индукции свободнорадикального окисления in vitro)
стр. 4
--------------------------------------------------------------------------------
венно на 38 и 45% больше продуктов свободно-радикального окисления в участках депигментированной кожи, чем в пигментированной.
Таким образом, в 1-й группе пациентов зарегистрировано значительное повышение интенсивности свободнорадикального окисления, увеличение чувствительности депигментированных участков кожи к АФК-индуцированным процессам на фоне резкой активации супероксиддисмутазы и в ряде случаев - каталазы. Можно констатировать, что чрезмерный уровень АФК, закономерно вызывающий активацию эндогенной антиоксидантной защиты, не может быть компенсирован даже с помощью значительного увеличения активности ее компонентов. В данном случае наблюдается срыв равновесного балансного уровня про- и антиоксидантов. Такие пациенты, по-видимому, нуждаются в фармакологической коррекции с целью повышения антиоксидантного статуса клеток кожи.
Учитывая резкую активацию супероксиддисмутазы, зарегистрированную нами в 1-й группе, дополнительное внесение именно этого антиоксиданта может положительно сказаться при лечении этих пациентов. В настоящее время применяют экзогенное внесение ферментов антиоксидантной защиты в виде рекомбинантных форм, в том числе рекомбинантной супероксиддисмутазы (производство НПП "ТРИС" ). Как показали результаты наших экспериментов, так можно предупредить активацию свободнорадикального окисления при действии кислотного.
Во 2-й группе пациентов, те. у подростков, также было проанализировано соотношение про- и антиоксидантного статуса депигментированных участков кожи. Выявилась совершенно иная картина, нежели в 1-й группе. Активность супероксиддисмутазы в очагах витилиго была выше, чем в пигментированных участках кожи. Однако в отличие от 1-й группы, в которой наряду с резкой активацией антиоксидантной защиты не происходило компенсации свободнорадикального окисления, а интенсивность, его, напротив, возрастала, активация эндогенной антиоксидантной защиты во 2-й группе способствовала существенной компенсации свободнорадикальных процессов в очаге витилиго. Исходный уровень тиобарбитуратактивных продуктов не менялся, а при индукции окисления in vitro повышение уровня продуктов окисления на 18% в депигментированном участке кожи, по сравнению с пигментированным, зарегистрировано лишь при 20 мин инкубации.
Таким образом, налицо принципиальная разница в соотношении про- и антиоксидантных компонентов у взрослых и подростков, больных витилиго. Очаг витилиго в обоих случаях характеризуется повышенным уровнем ферментов антиоксидантной защиты, что позволяет частично компенсировать интенсивность АФК-зависимых процессов у подростков. У взрослых пациентов аналогичной компенсации не происходит, видимо, антиоксидантная защита оказывается недостаточной.
Итак, оценка про- и антиоксидантного статуса больных витилиго позволяет выбрать наиболее адекватный и эффективный способ коррекции этого заболевания, что возможно либо с помощью антиоксидантов, либо используя стимуляцию свободнорадикальных процессов. При этом терапия должна подбираться для конкретного пациента с определенным, строго индивидуальным соотношением про- и антиоксидантных компонентов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Патент на изобретение N2241992 - 2003 Корсунская И. М., Дворянкова Е. В., Сазонтова Т. Г., Архипенко Ю. В., Ефремова Е. И., Жукова А. Г. Способ определения состояния свободнорадикального окисления и антиоксидантных систем в участках поражения кожи больных витилиго.
2. Вайсов А. Ш., Герасимов Н. М., Далимова С. Н., Исанбаева Д. М. Влияние ПУВА-терапии на содержание циклических нуклеотидов и катехоламинов в коже и крови у больных витилиго. Сборник научных трудов: Вопросы патогенеза и терапии кожных и венерических заболеваний. - Ташкент, 1989. - С.23 - 24.
3. Кошевенко Ю. Н. Фототерапия витилиго: обоснование, особенности, клинический эффект // Росс. журн. кожн. и венерол. болезней. - 2001. - N3. - С.58 - 66.
4. Сазонтова Т. Г., Дурнев А. Д., Гусева Н. В., Колмыкова С. Н., Середенин С. Б. Антиоксидантные ферменты и перекисное окисление липидов у мышей C57BI/6 и BALB/c // Бюлл. экспер. биол. мед. - 1995. - Т.120, N.12. - С.580 - 583.
5. Сазонтова Т. Г. Закономерности модуляции антиоксидантного статуса клетки в ответ на активацию свободнорадикального окисления // Hypoxia Med.J. - 2002. - N1 - 2. - Р.2 - 9.
стр. 5
--------------------------------------------------------------------------------
6. Сергеев П. В., Ухина Т. В., Шимановский Н. Л. Влияние разных лекарственных форм прогестерона на перекисное окисление липидов и редокс-систему глутатиона в тканях кожи крыс при экспериментальном дерматите // Бюлл. экспер. биол. и мед. - 2000. - Т. 129, N1. - С.186 - 188.
7. Akyol M., Celik V.K., Ozcelik S. et al. The effects of vitamin E on the skin lipid peroxidation and the clinical improvement in vitiligo patients treated with PUVA // Eur. J. Dermatol. - 2002. - Jan-Feb;12(1):24 - 26.
8. Arkhipenko Yu.V., Sazontova T.G. Mechanisms of the cardioprotective effect of a diet enriched with n-3 polyunsaturated fatty acids // Pathophysiology. - 1995. - Vol.2, N2. - P.131 - 140.
9. Arkhipenko Yu.V., Sazontova T.G.; Rice-Evans C. Hypertrophy and regression of rat heart: free radical related metabolic systems // Pathophysiology. - 1997. - Vol.4, N4. - P.241 - 248.
10. Barrington P.L., Lai E., McCay R.B. Lack of myocardial lipid peroxidation during acute reperfusion injury in perfused guinea pig hearts // Cardiovasc. Res. - 1993. - Vol.27, N7. - P.1339 - 1345.
11. Beauchamp C., Fridovich I. Superoxid dismutase: improved assay and an assay applicable to acrilamide gels // Analit Biochem. - 1971. - Vol. 44. - P. 276 - 287.
12. Beazley W.D., Gaze D., Panske A. et al. Serum selenium levels and blood glutathione peroxidase activities in vitiligo // Br. J. Dermatol. - 1999. - Aug; 141(2):301 - 303.
13. Bowers R.R., Nguyen В., Buckner S. et al. Role of antioxidants in the survival of normal and vitiliginous avian melanocytes // Cell. Mol. Biol. (Noisy-le-grand). - 1999. - Nov;45(7): 1065 - 1074.
14. Cai Y.N., Appelkvist E.L., Depierre J.W. Hepatic oxidative stress and related defenses during treatment of mice with acetylsalicylic acid and other peroxisome proliferators //J.Biochem.Toxicol. - 1995. - Vol.10, N2. - P.87 - 94.
15. Cogrel P., Morel I., Lescoat G. et al. The relationship between fatty acid peroxidation and alpha-tocopherol consumption in isolated normal and transformed hepatocytes // Lipids. - 1993. - Vol.28, N2. - P.115 - 119.
16. DellAnna M.L., Maresca V., Briganti S. et al. Mitochondrial impairment in peripheral blood mononuclear cells during the active phase of vitiligo // J. Invest. Dermatol. - 2001. - Vol. 117(4). - P. 908 - 913.
17. DellAnna M.L., Urbanelli S., Mastrofrancesco A. et al. Alterations of mitochondria in peripheral blood mononuclear cells of vitiligo patients // Pigment. Cell. Res. - 2003. - Oct;16(5):553 - 559.
18. Davies J.J.A., Qintanilla A.T., Brooks G.A., Packer L. Free radicals and tissue damage produced by exercise // Biochem. Biophys. Res. Comm. - 1982. - Vol.107. - P.1198 - 1205.
19. Fandrey J. Hypoxia-inducible gene expression // Respir. Physiol. - 1995. - Vol.101. - P.1 - 10.
20. Flohe L., Brigelius-Flohe R., Salion С. et al. Redox regulation of NF-kappa В activation // Free Rad. Biol. Med. - 1997. - Vol.22. - P.1115 - 1126.
21. Fuchs J., Herrling Th., Groth N. Detection of free radicals in skin: a review of the literature and new developments. // In: Oxidants and antioxidants in cutaneous biology. Eds: Thiele J., Eisner P. Current Problems in Dermatology. - 2001. - Vol.29. - P.1 - 17.
22. Furuno K., Sugihara N. Effect of cumene hydroperoxide on lipid peroxidation in cultured rat hepatocytes supplemented with eicosapentaenoic acid // Biol. Pharm. Bull. - 1994. - Vol.17, N3. - P.419 - 422.
23. Hanselmann C., Mauch C., Werner S. Haem oxygenase-1: a novel player in cutaneous would repair and psoriasis // Biochem. J. - 2001. - Vol.353. - Р. 459 - 466.
24. Hart B.A., Prabhu R.M., Eneman J.D. Oxidant resistance of cadmium-adapted human lung fibroblasts // Toxicology. - 1995. - Vol.98, N1 - 3. - P.1 - 13.
25. Herbaczinska C.K., Gordon M.W. Evidence for increased lipid peroxidation in the nonischemic portion of the heart with coronary occlusion. // Acta Physiol. Pol. - 1988. - Vol.39, N2. - P.151 - 155.
26. Juhlin I., Olsson M.J. Improvement of vitiligo after oral treatment with vitamin B12 and folic acid and the importance of sun exposure // ACTA Derm. Venerol. - 1997; 77:460 - 461.
27. Lai C.O., Peng M., Huang L. et al. Chronic exposure of neonatal cardiac myocytes to hydrogen peroxide enhances the expression of catalase // J. Mol. Cell. Cardiol. - 1996. - Vol.28, N5. - P.1157 - 1163.
28. Le-Poole I.С. et al. Catechol-O-methyltransferase in vitiligo // Arch-Dermatol-Res. - 1994; 286(2): 81 - 86.
29. Meffert H., Diezel W., Sonnichsen N. Stable lipid peroxidation products in human skin: detection, ultraviolet light-induced increase, pathogenic importance // Experientia. - 1976. - Nov; 15;32(11):1397.
30. Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction // Analyt Biochem. - 1979. - Vol.95. - P.351 - 358.
31. Ortel B., Tanew A., Honigsman H. Treatment of vitiligo with khellin and ultraviolet light//J. Am. Acad. Dermatol. - 1988; 18: 693 - 701.
32. Paglia D., Valentin W. Studies of a quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutation peroxidase // J. Lab. Clin. Methods. - 1967. - Vol. 70. - P. 158 - 169.
33. Parsad D., Pandhi R., Juneja A. Effectiveness of oral Ginkgo biloba in treating limited, slowly spreading vitiligo // Clin. Exp. Dermatol. - 2003. - May;28(3):285 - 287.
стр. 6
--------------------------------------------------------------------------------
34. Passi S., Picardo M., De Luca M. et al. Treatment of vitiligo with an antioxidant pool // Melanoma Res. - 1995, 5:p25 (abstract 37).
35. Passi S., Grandinetti M., Maggio F. et al. Epidermal oxidative stress in vitiligo // Pigment. Cell. Res. - 1998. - Apr;11(2):81 - 85.
36. Peng J., Jones G.L., Watson K. Stress proteins as biomarkers of oxidative stress: effects of antioxidant supplements // Free Rad. Biol. Med. - 2000. - Vol.28, N11. - P. 1598 - 1606.
37. Picardo M., Dell'Anna M.L. et al. Antioxidant imbalanse in vitiligo: the basis for the new look for the disease // Abstracts of the 9th Congress of the EADV. - Geneva, 2000:27.
38. Sazontova T.G., Tkatchouk E.N., Kolmykova S.N. et al. Comparative analysis of peroxidation and antioxidant enzyme activities in rats adapted to different regimes of normobaric hypoxia // Hypoxia Med.J. - 1994. - N4. - P.4 - 7.
39. Schallreuter K.U., Wood J.M., Lemke K.R. et al. Treatment of vitiligo with topical application of pseudocatalase and calcium in combination with short-term UVB exposure: a case study on 33 patients // Dermatology. - 1995; 190:223 - 229.
40. Schallreuter K.U., Wood J.M., Lemke K.R. et al. Successful treatment of vitiligo with pseudocatalase and short.-term. UVB exposure // Melanoma Res. - 1995a; 5:p (abstract 38).
41. Schallreuter K.U., Moore J., Wood J.M. et al. In vivo and in vitro evidance for hydrogen peroxide (H2 O2 ) accumulatio in the epidermis of patients with vitiligo and its successful removal by a UVB-activated pseudocatalase // J. Invest. Dermatol. Symp. Proc. - 1999. - Sep; 91 - 96.
42. Siddiqui A.H., Stolk L.M.L., Bhaggol R. et al. L-phenylalanin and UVA iddadiation treatment of vitiligo //J. Dermatol. - 1994,188:215 - 218.
43. Thomas S., Lowe J.E., Hadjivassiliou V. et al. Use of the Comet assay to investigate the role of superoxide in glutathione-induced DNA damage // Biochem. Biophys. Res. Communs. - 1998. - Vol.243, N1. - P.241 - 245.
44. Yildirim M., Vahide Baysal, H. Serhat Inaloz, Demet Kesici and Namik Delibas. The Role of Oxidants and Antioxidants in Generalized Vitiligo // J. Dermatol. - 2003.30(2): 104 - 108.
стр. 7
Комментарии:
ИНФОРМАЦИЯ ПО РЕФЕРАТУ:
СТУДЕНТАМ! Уважаемые пользователи нашей Коллекции! Мы напоминаем, что наша коллекция общедоступная. Поэтому может случиться так, что ваш одногруппник также нашел эту работу. Поэтому при использовании данного реферата будьте осторожны. Постарайтесь написать свой - оригинальный и интересный реферат или курсовую работу. Только так вы получите высокую оценку и повысите свои знания.
Если у вас возникнут затруднения - обратитесь в нашу Службу заказа рефератов. Наши опытные специалисты-профессионалы точно и в срок напишут работу любой сложности: от диссертации до реферата. Прочитав такую качественную и полностью готовую к сдаче работу (написанную на основе последних литературных источников) и поработав с ней, вы также повысите ваш образовательный уровень и сэкономите ваше драгоценное время! Ссылки на сайт нашей службы вы можете найти в левом большом меню.
ВЕБ-ИЗДАТЕЛЯМ! Копирование данной работы на другие Интернет-сайты возможно, но с разрешения администрации сайта! Если вы желаете скопировать данную информацию, пожалуйста, обратитесь к администраторам Library.by. Скорее всего, мы любезно разрешим перепечатать необходимый вам текст с маленькими условиями! Любое иное копирование информации незаконно.
Поиск по БЕЛОРУССКИМ рефератам 
